薄層色譜儀在相同的實驗條件下,能夠得到重復性較好的結果。這有助于研究人員驗證實驗結果的準確性和可靠性,可以通過顯色劑或紫外燈等手段使斑點顯色,從而直觀地觀察到分離結果。這有助于研究人員快速判斷樣品的純度和成分,適用于多種類型的化合物分離和定性分析,包括有機化合物、無機化合物、生物大分子等。這使得它在化學、生物化學、醫藥等多個領域都得到了廣泛的應用。
薄層色譜儀的測定步驟:
-選擇合適的玻璃板,要求光滑、平整,洗凈后不附水珠,晾干。
-根據需要選擇合適的固定相,如硅膠和適當的粘合劑(如羧甲基纖維素鈉水溶液)混合制成勻漿。
-將固定相涂布于玻璃板上,一般可涂成0.2~0.3mm厚的薄層。
-涂布后的薄層板需在室溫下晾干,然后在110℃烘30分鐘左右,再置于有干燥劑的干燥箱中備用。
-在距薄層板底邊2.0cm處劃一條基線,作為點樣的起始位置。
-用點樣器或毛細管吸取適量樣品溶液,小心地在薄層板上進行點樣,形成直徑不超過5mm的圓點。
-點樣時應注意勿損傷薄層表面,并保持點樣量適中,以免影響分離效果。
-在展開缸中加入適量的展開劑,預先飽和一段時間。
-將點好樣的薄層板放入展開缸中,浸入深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中)。
-密封缸蓋,待展開至規定距離(一般為10~15cm)后取出薄層板。
-展開結束后,取出薄層板并立即用鉛筆畫下溶劑前沿位置。
-根據化合物的特性選擇適當的顯色方法,如紫外光照射、碘蒸汽熏蒸或噴灑顯色劑等。
-在規定的波長下觀察斑點顏色,測量比移值(Rf),并進行記錄。